Dalam biologi molekuler, isolasi RNA utuh adalah langkah awal yang krusial untuk berbagai aplikasi hilir, termasuk PCR, RT-qPCR, sekuensing RNA, dan studi ekspresi gen. Ribonuklease (RNase), enzim yang ada di mana-mana di lingkungan dan pada kulit, sangat efisien dalam mendegradasi RNA. Untuk menetralkan aktivitasnya yang meresap, reagen spesifik digunakan selama proses isolasi. Di antara yang paling efektif adalah Ditiotreitol (DTT), agen pereduksi kuat yang memainkan peran penting dalam mempertahankan integritas RNA. Bagi para peneliti yang mencari protokol isolasi RNA yang andal, mendapatkan DTT berkualitas tinggi dari produsen terpercaya seperti NINGBO INNO PHARMCHEM CO.,LTD. adalah hal yang terpenting.

Memahami Aktivitas dan Inhibisi RNase

RNase adalah enzim yang mengkatalisis hidrolisis molekul RNA. Banyak RNase mengandalkan ikatan disulfida di dalam strukturnya untuk mempertahankan konformasi aktifnya. Ikatan disulfida ini sensitif terhadap agen pereduksi. DTT, yang dikenal secara kimia sebagai Reagen Cleland, berfungsi dengan memecah ikatan disulfida ini. Ketika DTT ditambahkan ke buffer isolasi RNA, DTT secara efektif mereduksi ikatan disulfida pada enzim RNase, membuatnya tidak aktif dan mencegahnya mendegradasi sampel RNA yang berharga. Ini adalah mekanisme fundamental yang menjadikan DTT komponen penting dalam kit dan protokol ekstraksi RNA.

Bagaimana DTT Meningkatkan Hasil dan Kemurnian Isolasi RNA

Dengan menghambat aktivitas RNase, DTT secara langsung berkontribusi pada hasil yang lebih tinggi dan kemurnian RNA yang terisolasi lebih besar. Tanpa penghambatan RNase yang efektif, bahkan sejumlah kecil enzim residual dapat menyebabkan degradasi RNA yang signifikan, membahayakan eksperimen hilir. Penggunaan DTT dalam buffer lisis atau buffer pencuci membantu menciptakan lingkungan di mana RNA tetap utuh selama prosedur isolasi. Peneliti sering perlu membeli DTT dalam jumlah besar untuk ekstraksi RNA skala besar atau untuk digunakan dalam berbagai alur kerja biologi molekuler di mana kontaminasi RNase menjadi perhatian. Ketersediaan dari pemasok utama NINGBO INNO PHARMCHEM CO.,LTD. memastikan pasokan yang stabil untuk kebutuhan laboratorium.

Penggunaan Optimal DTT dalam Isolasi RNA

Efektivitas DTT bergantung pada konsentrasi dan kondisi buffer spesifik. Biasanya, DTT digunakan pada konsentrasi berkisar dari 1 mM hingga 10 mM dalam buffer lisis. Penting untuk menyiapkan larutan DTT segar segera sebelum digunakan, karena DTT rentan terhadap oksidasi. Penyimpanan bubuk DTT yang tepat pada suhu rendah di lingkungan yang kering sangat penting untuk mempertahankan potensinya. NINGBO INNO PHARMCHEM CO.,LTD. menyediakan DTT dengan kemurnian tinggi yang terjamin, memastikan bahwa Anda menerima reagen yang berkinerja konsisten. Saat merencanakan eksperimen isolasi RNA Anda berikutnya, pastikan Anda memiliki pasokan DTT yang andal dari produsen material terkemuka untuk melindungi sampel RNA Anda yang berharga.