Les immunoessais, tels que les dosages immunoenzymatiques (ELISA) et les western blots, sont des outils puissants pour détecter et quantifier des protéines ou des anticorps spécifiques. Cependant, un défi courant dans ces techniques réside dans le potentiel de liaison non spécifique des anticorps ou des réactifs de détection à des sites autres que l'antigène cible. Cette liaison non spécifique peut entraîner des signaux de bruit de fond élevés, masquer les véritables résultats positifs et compromettre la sensibilité et la spécificité de l'essai. L'Albumine Sérique Bovine (BSA) joue un rôle essentiel pour atténuer ce problème en agissant comme un agent bloquant efficace.

Le principe derrière l'action bloquante de la BSA est simple mais très efficace. La BSA est une protéine relativement grande, stable et modérément non réactive. Lorsqu'elle est introduite dans le système d'essai, elle se lie facilement aux sites inoccupés sur le support en phase solide (par exemple, les puits de microplaques, les surfaces de membrane) qui ne sont pas occupés par l'antigène ou l'anticorps cible immobilisé. En occupant ces sites de liaison non spécifiques, la BSA crée une barrière physique qui empêche les anticorps ou les réactifs de détection de se lier à ces sites.

Dans le cas du western blot, par exemple, après que l'anticorps primaire s'est lié à sa protéine cible, la membrane est généralement incubée avec de la BSA. Cette incubation sature tous les sites ouverts restants sur la membrane, garantissant que lorsque l'anticorps secondaire conjugué à une enzyme est ajouté, il se lie principalement à l'anticorps primaire et non à la membrane elle-même. Cela réduit considérablement le bruit de fond, facilitant la visualisation et la quantification des bandes protéiques spécifiques d'intérêt.

De même, dans les ELISA, la BSA est utilisée pour bloquer les sites libres dans les puits de microplaques après le revêtement par l'antigène ou l'anticorps. Cette étape est essentielle pour empêcher l'anticorps de détection ou l'anticorps conjugué à une enzyme de se lier de manière non spécifique à la surface du puits, ce qui entraînerait des signaux faux positifs. Le choix de la concentration de BSA et du temps d'incubation pour le blocage peut être optimisé en fonction de l'essai spécifique et des anticorps utilisés, mais généralement, une concentration de 1 à 5 % de BSA dans un tampon approprié est efficace.

De plus, la BSA est souvent préférée comme agent bloquant lors de l'utilisation d'anticorps sensibles à la caséine, un composant courant des solutions de blocage à base de lait. Par exemple, les anticorps phospho-spécifiques, qui ciblent des épitopes phosphorylés, peuvent parfois présenter une réactivité croisée avec la caséine. Dans de tels cas, l'utilisation de BSA comme bloqueur offre une alternative plus propre, prévenant de telles interférences et garantissant la détection précise des protéines phosphorylées.

La disponibilité de la BSA dans diverses qualités, y compris sans protéase et sans acides gras, améliore encore son utilité. La BSA sans protéase garantit que les enzymes qui pourraient dégrader la protéine cible ou les anticorps ne sont pas introduites dans le système. La BSA sans acides gras est bénéfique dans les essais où les acides gras libres pourraient interférer avec la détection ou l'activité de la molécule cible.

En résumé, l'Albumine Sérique Bovine est un réactif indispensable dans l'arsenal du développement et de l'exécution des immunoessais. Sa capacité à bloquer efficacement les sites de liaison non spécifiques améliore considérablement la sensibilité, la spécificité et la reproductibilité des essais, ce qui en fait une pierre angulaire pour des résultats immunoanalytiques fiables.